这次回家有个亲戚,在家想搞点技术赚点钱.他看到了一些关于溶解酶的消息.想让帮看看这
方面的消息.真的很可惜我的专业对这方面了解的不多.只好在这里求助大家了.
在网上看到用鸡蛋提取一种叫容菌酶一种技术,不知道可不可信,上面说这种叫容菌酶的
提取一公斤出来要七十公斤鸡蛋,但容菌酶的回收价非常的高每公斤的回收价高达三千二
一公斤,不知道这个可信吗
溶菌酶是一种国内外市场上很紧俏的生化产品,广泛应用于医学临床。溶菌酶具有抗
炎作用,能保护机体不受感染,加速粘膜组织的修复和再生。溶菌酶与抗菌素具有良好的
协同增效作用,可用于多种炎症,如鼻炎、肝炎、中耳炎、口腔溃疡等。使溶菌酶十分抢
手、身价偌增的另一个重要原因是:溶菌酶是细胞工程、基因工程必不可少的工具酶。
溶菌酶是一种碱性球蛋白,广泛存在于家禽和鸟类的蛋清中。
哺乳动物的唾液、眼泪、尿、血浆及某些植物如萝卜、卷心菜中都含有溶菌酶。蛋清
中溶菌酶含量最丰富。
人们在食用鸡蛋时,蛋壳一般都弃作废物。其实蛋壳里带有残留蛋清,因此可以利用
蛋壳来制备溶菌酶。
一、原料与试剂
新鲜或冰冻的带有残留蛋清的蛋壳;氯化钠、氢氧化钠、碳酸钠、乙醇、醋酸钠(以
上均为化学纯试剂)、聚丙烯酸(60000-80000)。
二、制备方法
1、提取
将蛋壳用水冲洗干净后敲碎,放入搪瓷桶中,按蛋壳重量的70%-80%加入1%的氯化
钠溶液,搅拌均匀,用1:10盐酸调节溶液的pH值为6.0(用精密pH试纸测试)。将搪瓷桶
缓慢加热至约40℃,保持1小时,并随时添加盐酸,使pH值维持在6.0。提取完毕后,用尼
龙纱布过滤,收集滤液。滤渣可用1/2量的1%氯化钠溶液再提取一次,将两次滤液合作。
2、除杂
将滤液用20%-30%的醋酸调节pH值至4.6,在沸水中迅速加热到约80℃,然后用冷水
快速冷却到室温,沉淀10小时左右,再用尼龙纱布吊滤,除去杂蛋白,收集滤液。
3、凝聚
用20%氢氧化钠溶液调节滤液的pH值为6.0,一边搅拌,一边滴加10%的聚丙烯酸,
加入量为滤液重量的20%-25%。静置约半小时,待凝聚物完全附着容器底部后,将上层清
液倾去。
4、解离
在装有凝聚物的容器中,加少许蒸馏水,边搅拌边滴加少量纯碱溶液,使凝聚物溶解
并调节pH值至4.0。滴加50%的氯化钙溶液使溶菌酶离解,用布吊滤,收集滤液。
5、结晶
在滤液中加入少量氢氧化纳溶液,使严值约为9.5,静置约6小时,用尼龙布过滤,分
出清液,再加氯化钠至浓度为5%,静置4小时,得到粗结晶。
6、重结晶
粗结晶产品纯度不够,需进行重结晶。将粗结晶用pH值4.6的醋酸溶解,过滤除运河
不溶物,静置再结晶,经干燥后即得溶菌酶产品。
三、活性测定方法
1、配制底物溶液
取1克标记乙二醇化几丁于200毫升烧杯中,加入0.1摩尔/升、pH值4.5的醋酸-醋酸
钠缓冲溶液100毫升,搅拌30分钟,离心后即得深蓝色通明的底物溶液。
2、配制溶菌酶标准溶液
在天平上准确称取60.00毫克生化试剂溶菌酶,用上述醋酸一醋酸钠缓冲溶液溶解并
定容至100毫升含0.6毫克溶菌酶。
3、绘制标准曲线
取6支试管,分别加入1.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5毫升底物溶液,水浴(4
0℃)预热。各加入0.5毫升溶菌酶标准溶液,依次加入1.0、0.9、0.8、0.7、0.6、
0.5毫升醋酸一醋酸钠缓冲溶液,在40℃下反应30分钟。再各加醋酸乙醇(加醋酸于乙醇
中使pH值为2.5)5毫升,离心分离后,取上层清液,在波长600纳米处测定吸光度。以吸
光底对底物含量作图,绘制标准曲线。
4、样品测定
天平上准确称取一定量的溶菌酶样品,用醋酸一醋酸钠缓冲溶液溶解,配成0.20毫克
/毫升的样品溶液。
移取底物溶液1毫升,40℃下水浴预热,然后加入样品溶液0.5毫升,反应30分钟后,
加入5毫升酸乙醇溶液。离心介离,取上层清液,在600纳米处测定吸光度。由吸光度值从
标准曲线上可查出溶菌酶含量。
以下是一些问题:
1.不知理论上的可行性.有多少?
2.看以上的流程不很复杂,如果投入生产.对于工具的要求会高吗?(生产工具)
※ 来源:·BBS 水木清华站
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FROM 61.185.20.*